赫爾曼等(1996)采用了基于重亞硫酸鹽處理的新方法。該法靈敏度高，主要用于定性研究。基因組DNA采用亞硫酸氫鹽處理后，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，但胞嘧啶甲基化不變;隨后針對甲基化和非甲基化序列設(shè)計PCR引物。對MSP擴增產(chǎn)物進行電泳檢測，若以處理后的DNA甲基化引物為靶點，可獲得擴增片段，表明其存在甲基化;反之，則表明所檢測的位點沒有甲基化。用途廣泛，可用于檢測特定位點是否發(fā)生甲基化。
亞硫酸氫鹽測序(BisulfitesequencingPCR,BSP)
由亞硫酸氫鹽修飾后測序方法(BSP),Frommer等(1992)提出的DNA甲基化研究方法，該方法具有較高的可靠性和精確度，可以確定目標片段各CpG位點的甲基化狀態(tài)?；蚪MDNA采用亞硫酸氫鹽處理后，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而未發(fā)生甲基化的胞嘧啶沒有變化。然后設(shè)計BSP引物用于PCR，擴增后的尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，后對PCR產(chǎn)物進行序列測定，以確定CpG位點是否發(fā)生甲基化，即所謂的BSP-直接測序。通過將PCR產(chǎn)物克隆到載體上進行序列測定，可以提高測序的成功率，這種方法被稱為BSP-序列測定法。
特點：高度精確，能準確檢測甲基化程度百分比。
脫氧核糖核酸甲基化是基因表達調(diào)控的重要機制，檢測脫氧核糖核酸甲基化意味著要用多種方法來檢測腫瘤細胞DNA甲基化程度。惡性病變發(fā)展過程中，甲基化狀態(tài)并非一成不變，腫瘤細胞內(nèi)全基因組甲基化水平的降低與疾病的進展、腫瘤的大小及惡性程度密切相關(guān)，DNA甲基化檢測對于判斷腫瘤的惡性程度具有重要意義。
檢測流程步驟
溫馨提示：以上內(nèi)容僅供參考使用，更多檢測需求請咨詢客服。
